单抗和多抗制备应用的区别

来源:网络整理作者:乐发国际 日期:2021/05/04 14:11 浏览:

单抗与多抗的界说

抗原上可以引起机体发生抗体的分子布局叫做抗原抉择簇,也称为抗原表位。一个抗原可以有很多差异的抗原抉择簇,因此,机体也可以发生多种差异的抗体。由单一B细胞克隆发生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体,称为单克隆抗体(单抗)。而由多个B淋巴细胞克隆发生的,受到多种抗原抉择簇刺激并可以与多种抗原表位团结的抗体就是多克隆抗体(多抗)。从某种角度而言,多抗是多种单抗的殽杂物。

单抗和多抗制备上的区别

颠末特定抗原处理惩罚过的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的要领获得杂交瘤细胞,经HAT造就基筛选、ELISA检测效价后就获得阳性克隆株,乐发国际,最后举办细胞造就或将细胞注入到动物(一般为balb/c小鼠)腹腔顶用腹水造就,收集上清/腹水纯化后就能获得单克隆抗体。而制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐,只需将抗原(纯度越高越好)直接注入到动物体内举办免疫,颠末3~4次免疫,ELISA测其效价及格后,收集血液离心获得上清,纯化后即能获得多克隆抗体。因此多抗制备周期比单抗的短,多抗首次制备价值也比单抗要低。

单抗多抗应用上的区别

单抗和多抗都有各自光鲜的特点与优势。单克隆抗体的特异性高,一旦制备乐成绩可以永续的出产完全一致的单克隆抗体,因此可以对其特异性举办全面、系统地验证。但假如所识此外抗原表位被粉碎,尝试的功效将会受到很大的影响,这也是单抗的缺点之一。而多克隆抗体的特异性较差,纵然是利用沟通的抗原制备多抗,差异批次间也会存在差别,因而在特异性、一致性方面有很大的范围。所以在用多抗做免疫检测时,更容易造成配景,譬喻在WB中有杂带,在IHC中配景较深等等。固然还存在着交错回响*的问题,但由于多抗识别多个抗原表位,纵然是有少数几个抗原表位被粉碎可能抗原构象改变,尝试的功效也不会受到影响。在沟通条件下,利用多抗可以提高检测的敏捷度,对付品貌偏低的卵白也更容易检出。

假如反抗体的特异性要求高,用量较大或需要恒久利用一致的抗体,制备的抗体应用要求多(WB/IP/IF/ICC等),可以选择制备单克隆抗体。若反抗体的特异性要求不高,需要做沉淀和凝集回响的检测性尝试可能只需做ELISA检测,可以选择制备多克隆抗体。

单克隆抗体与多克隆抗体与抗原团结比拟

单克隆抗体与多克隆抗体的比拟表格   多克隆抗体   单克隆抗体  
对免疫原的要求   免疫原纯度越高越好   不纯的免疫原也能获得高纯度的抗体  
特异性   高(抗原亲和纯化)    
不变性   较好   相对较差,对理化条件敏感  
尺度化   较难,差异批次的抗体质量差别大   易于尺度化,批次间差别小  
识别   多表位   只有一个抗原表位  
交错回响   很常见,难制止非特异回响   不常见,可制止非特异回响  
凝集回响     大大都没有  
沉淀回响     大大都没有  
本钱      
周期      

* 交错回响:从理论上说,用小鼠抗原制备的抗体应只能用于小鼠,可是由于动物种属之间,出格是临近的动物之间存在着同源性(如大鼠与小鼠),这样会导致抗体产生交错回响,即用一种动物抗原制备的抗体也可与其它一些物种的抗原回响。

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